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摘 要 目的: 研究綠原酸對移植性腫瘤的影響及與阿霉素聯(lián)合用藥后是否具有增敏作用。方法: 建立H 22肝癌、Lew is肺癌移植瘤模型, 考察綠原酸對移植瘤的抑制作用及與阿霉素聯(lián)合用藥后對阿霉素抗腫瘤作用是否有增敏作用。結(jié)果: 與模型組比較, 綠原酸對H 22肝癌、Lew is肺癌移植瘤有明顯的抑制作用, 劑量20mg /kg 的抑制作用最強(qiáng); 與阿霉素聯(lián)合用藥后對腫瘤的抑制作用有一定增強(qiáng)趨勢, 但與單用阿霉素比較無顯著性差異。結(jié)論: 綠原酸可顯著對抗H 22肝癌、Lew is肺癌移植瘤的生長, 但與阿霉素聯(lián)合用藥對其腫瘤的抑制作用無增敏性。

關(guān)鍵詞 綠原酸; 阿霉素; H 22肝癌; Lew is肺癌

綠原酸( CHA )是咖啡酸和奎寧酸酯, 是人類飲食中含量豐富的一種多酚類化合物, 存在于多種植物( 杜仲、金銀花、咖啡) 、水果( 番茄、蘋果、梨)、蔬菜(大蒜、馬鈴薯) 中, 具有多種生物學(xué)活性, 其抗腫瘤方面作用成為近年來研究熱點, 但僅僅局限于從分子水平探討其對腫瘤細(xì)胞的影響, 從整體水平考察其抗腫瘤藥效學(xué)研究甚少。本課題主要爭對從杜仲葉中提取純化綠原酸開展抗腫瘤方面實驗研究, 報告如下。

1 材料與方法

1. 1 試驗藥物 綠原酸( CHA), 類白色粉末, 含量, 99. 87%,批號, 061101, 由四川九章生物化工科技發(fā)展有限公司提供。阿霉素( ADM ): 紅色粉針劑, 10m g /瓶, 批號: 0602E1, 由深圳萬樂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1. 2 細(xì)胞株 H 22肝癌、Lew is肺癌細(xì)胞株, 分別由四川大學(xué)實驗動物中心細(xì)胞室、四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院藥理室提供。懸浮/貼壁生長于RPM I-1640培養(yǎng)基中, 內(nèi)含10%小牛血清, 100U /m l青霉素、100Lg /m l鏈霉素于37e 、5% CO2 的飽和濕度孵箱中培養(yǎng), 每2~ 3天換液傳代。

1. 3 動物 昆明種小鼠, SPF 級, a , 體重18. 0~ 22. 0g, 由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院提供, 許可證號: scxk ( 川) 2005-19 號。C57BL /6小鼠, SPF級, a , 體重16. 0~ 19. 0g, 由四川大學(xué)實驗動物中心提供, 許可證號: 第9號。

1. 4 方法

1. 4. 1 對H 22肝癌移植瘤的影響 建立H 22肝癌模型[ 1] : 收獲處于對數(shù)生長期的H 22細(xì)胞接種于昆明種小鼠左前腋窩下0. 2m l/只, 待腫瘤長大時作為種鼠供實驗用。無菌剝離種鼠腫瘤制成細(xì)胞懸液, 并按0. 2m l/只( 1 @ 106 個) 接種于小鼠左前腋窩下。按體重將小鼠隨機(jī)分為6組, 每組9只, 分別為綠原酸高( 20m g /kg)、中( 10m g /kg)、低( 5m g /kg)劑量組, 聯(lián)合用藥組( 綠原酸20m g /kg, ADM 2m g /kg) , ADM 組2m g /kg 和模型組( NS)。于接種后的第二天開始靜脈( iv) 給藥, 每日一次, ADM 組連續(xù)給藥5天, 其余各組連續(xù)給藥9天。于接種后第6 天開始測量腫瘤體積( V= 0. 52 @ 移植瘤長徑L @ 移植瘤最短徑W2) 。待陰性組平均瘤重大于1. 0g (瘤體積約為0. 5 cm3 )時停止實驗,脫頸椎處死小鼠并稱重, 剝?nèi)∧[瘤稱重, 計算抑瘤率% = [ 1 -(給藥組平均瘤重/陰性組平均瘤重) ] @ 100%; 聯(lián)合用藥合并Q 值, 同時解剖小鼠取出脾、胸腺稱重, 計算臟器系數(shù)。

1. 4. 2 對Lew is 肺癌移植瘤的影響 建立Lewis 肺癌模型 , 按體重將C57 BL /6小鼠隨機(jī)分為6組, 每組10只, 分別為綠原酸高( 40m g /kg)、中( 20mg / kg) 、低( 10m g /kg) 劑量組, 聯(lián)合用藥組(綠原酸20mg / kg、ADM2mg /kg ), ADM 組( 2mg /kg )和模型組( NS)。于接種后的第二天開始腹腔( ip)給藥, 每日一次,ADM 組連續(xù)給藥8天, 其余各組連續(xù)給藥12天。于接種后第6天開始測量腫瘤體積, 待陰性組平均瘤重大于1. 0g (瘤體積約為0. 125px3 )時停止實驗, 脫頸椎處死小鼠并稱重, 剝?nèi)∧[瘤稱

重, 計算抑瘤率%, 合并用藥Q 值, 同時解剖小鼠取出脾、胸腺稱重, 計算臟器系數(shù)。

2 結(jié)果

2. 1 對H 22肝癌移植瘤生長體積、腫瘤的影響 綠原酸各劑量組、聯(lián)合用藥組、阿霉素組對H22肝癌的腫瘤具有明顯抑制作用, 抑瘤率均大于40%, 聯(lián)合用藥組與阿霉素組比較對腫瘤有一定的降低作用, 但無統(tǒng)計學(xué)差異, 合并Q 值為0. 914, 表明綠原酸與阿霉素聯(lián)合用藥后對阿霉素抑制H 22肝癌的生長無增強(qiáng)作用。

2. 2 綠原酸對H 22肝癌昆明種小鼠臟器指數(shù)、體重的影響綠原酸各劑量組對H 22肝癌小鼠免疫臟器系數(shù)(胸腺、脾)無影響, 但綠原酸高中劑量組對小鼠體重有抑制作用。聯(lián)合用藥組、阿霉素對臟器系數(shù)、體重有明顯抑制作用, 聯(lián)合用藥與單用阿霉素比較上述抑制作用有增強(qiáng)趨勢。

2. 3 對Lew is肺癌移植瘤生長體積、腫瘤的影響 綠原酸各劑量組、聯(lián)合用藥組、阿霉素組對Lew is肺癌有明顯抑制作用, 聯(lián)合用藥組與阿霉素組比較對瘤重有一定的降低作用, 但無統(tǒng)計學(xué)差異, 合并Q值為0. 950, 表明聯(lián)合用藥后對阿霉素抑制Lewis肺癌無增強(qiáng)作用。

2. 4 對Lew is肺癌移植瘤C57 BL /6小鼠臟器指數(shù)、體重的影響綠原酸對Lew is肺癌C57 BL /6小鼠免疫器官( 胸腺、脾臟) 臟器指數(shù)無明顯影響; 聯(lián)合用藥組、阿霉素對Lew is肺癌C57 BL /6小鼠上述臟器指數(shù)有明顯降低作用; 聯(lián)合用藥組的抑制作用更強(qiáng)于單用阿霉素組。

3 討論

本研究表明, 綠原酸對H 22肝癌、Lew is肺癌移植瘤均有明顯抑制作用, 但抑制作用未見劑量依賴性, 20mg /kg 表現(xiàn)出最強(qiáng)的抑制作用。綠原酸與阿霉素聯(lián)合用藥后合并Q值介于0. 85~ 1. 05 之間, 根據(jù)金氏公式得出聯(lián)合用藥對阿霉素抑制腫瘤的作用無增敏作用, 只是藥效學(xué)簡單的加和作用。綠原酸對胸腺、脾指數(shù)無任何影響, 而聯(lián)合用藥組和阿霉素有明顯降低作用; 實驗期間阿霉素和聯(lián)合用藥組動物出現(xiàn)體重減輕, 食欲降低, 毛發(fā)

無光澤脫落等現(xiàn)象, 而綠原酸和陰性組動物均無這些癥狀, 表明綠原酸抗腫瘤作用的同時并未表現(xiàn)出阿霉素對機(jī)體產(chǎn)生損傷的癥狀。文獻(xiàn)報道, 肝微粒體中細(xì)胞色素P450家族中CYP2B1可催化肝微粒體中EFC ( 7-乙氧基- 4- 三氟甲基- 香豆素) 的代謝, 促進(jìn)癌變; 綠原酸可抑制CYP2B1 活性, 從而抑制癌變的產(chǎn)生或發(fā)展; CYP2B1可降低ADM 的生物利用度, 使ADM 的代謝減緩。聯(lián)合用藥時綠原酸抑制機(jī)體內(nèi)CYP2B1 活性, 使ADM 代謝減緩療效毒性增加并伴隨對臟器的抑制作用增強(qiáng), 這與我們的研究結(jié)果是一致的。我們在考察綠原酸的抗腫瘤作用研究中, 其未表現(xiàn)出對機(jī)體免疫器官毒副作用, 有關(guān)其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。